實驗室里經(jīng)常會出現(xiàn)一種讓人頭疼的情況：

同一種細胞、同一臺電穿孔儀、同一個電轉(zhuǎn)程序，第一次效果很好，第二次一般，第三次突然又變差。

很多人首先懷疑設(shè)備是不是不穩(wěn)定。

但從實際實驗流程來看，電轉(zhuǎn)結(jié)果出現(xiàn)波動，并不一定是儀器本身的問題。

細胞電轉(zhuǎn)是一個對樣本狀態(tài)和實驗操作都比較敏感的過程。

首先，不同批次細胞的狀態(tài)可能已經(jīng)存在差異。

即使細胞名稱相同，只要融合度、傳代次數(shù)、生長速度或者復(fù)蘇時間不同，對電刺激的響應(yīng)就可能發(fā)生變化。

特別是一些對培養(yǎng)條件比較敏感的細胞，在顯微鏡下看起來差別并不明顯，但真正進行電轉(zhuǎn)之后，存活率和轉(zhuǎn)染效率可能相差很大。

其次，細胞數(shù)量也需要盡量穩(wěn)定。

有些實驗雖然每次使用相同程序，但實際加入電轉(zhuǎn)體系中的細胞數(shù)量并不一致。

細胞過多、過少或者存在明顯聚團，都可能影響電轉(zhuǎn)結(jié)果。

核酸條件同樣重要。

質(zhì)粒純度、RNA完整性、加入量以及樣品保存狀態(tài)，都可能影響最終表達效果。

如果只記錄電壓和脈寬，而不記錄這些實驗條件，后期出現(xiàn)問題時就很難判斷原因。

因此，想提高電轉(zhuǎn)重復(fù)性，建議把整個流程進行標準化。

例如固定細胞培養(yǎng)狀態(tài)、固定每次使用的細胞數(shù)量、固定電轉(zhuǎn)液體積、固定核酸用量，同時記錄具體的脈沖程序。

實驗完成后，可以同時記錄轉(zhuǎn)染效率和細胞存活率。

經(jīng)過幾輪實驗之后，就可以逐漸建立屬于自己實驗室的參數(shù)數(shù)據(jù)庫。

這比單純在網(wǎng)上尋找所謂的“萬能電轉(zhuǎn)參數(shù)"更加可靠。

另外，如果實驗中需要處理多種細胞或者多種應(yīng)用，電穿孔設(shè)備本身的參數(shù)調(diào)節(jié)范圍也比較重要。

實驗人員需要根據(jù)不同樣本，對電壓、脈寬、脈沖次數(shù)等條件進行調(diào)整，而不是只能使用少數(shù)固定程序。

電轉(zhuǎn)實驗真正難的地方，不是讓某一次實驗成功，而是讓同樣的實驗?zāi)軌蚍€(wěn)定重復(fù)。

只要把細胞狀態(tài)、樣品條件、操作流程和電轉(zhuǎn)程序同時進行標準化，很多所謂的“電轉(zhuǎn)不穩(wěn)定"問題都可以逐漸找到原因。